Introducere la iluminarea in camp intunecat - solutia cu slider
Pentru specimenele transparente, iluminarea in camp intunecat reprezinta o metoda de contrast simpla si accesibila. Ideea acestei tehnici este sa indice si sa accentueze structurile de margine, sa scoata in relief schimbarile bruste al indexului de refractie din interiorul specimenului. In special pentru organismele monocelulalre in mediu de apa dulce sau sarata, cu un indice al refractiei apropiat de al apei, metoda campului intunecat ofera imagini estetice, dar si pline de informatii utile.
Campul intunecat subliniaza marginile si structurile minuscule, izolate. In imaginea de mai jos puteti observa diferentele intre un diatom observat in camp luminos si camp intunecat.
Cum se obtine o astfel de imagine? Trebuie eliminata lumina directa care in mod normal trece prin specimen si care este responsabila cu fundalul luminos in iluminarea in camp luminos. Pentru obiectivele cu apertura numerica mai mica sau egala cu 0,65 acest lucru poate fi facut inserand un stop central pe traseul luminii pe intreaga inaltime a condensorului. Aperturile numerice mari necesita o aranjare mai sofisticata si obiective speciale cu diafragma iris.
Stopul central este o piesa rotunda de metal negru, montata intr-un atasament, un slider sau discul unui condensor turela. Stopul trebuie sa fie aliniat astfel incat sa sa se afle la mijlocul traseului optic. Procedura de aliniere este similara cu cea de la contrastul de faza in cazul careia inelele de iluminare trebuie sa fi pozitionate la fel de precis.
Dupa aceasta, specimenul este iluminat de lumina care trece prin orificiul din jurul stopului central sub forma unui con. Datorita lentilei frontale a condensorului, aceasta lumina va rata lentila frontala a obiectivului. In cazul in care nu exista niciun specimen plasat pe stand, utilizatorul va observa doar un camp intunecat.
Doar lumina care este influentata de structurile specimenului va ajunge in obiectiv. Rezultatul este aparitia unui fenomen luminos intr-un fundal intunecat. Dar aveti grija: nu vorbim despre o imagine inversata, in care albul devine negru si negrul devine alb si care nu aduce nicio informatie aditionala, ci doar o alta aparenta. Campul intunecat subliniaza structura si limitele specimenelor. O imagine a unei lame de calibrare care evidentiaza marginile:
Cum se realizeaza: Prima data pregatiti microscopul pentru observare in camp luminos - incepeti cu obiectivul de 10x. Daca este necesar, aliniati condensatorul KOEHLER (focalizati specimenul, centrati imaginea diafragmei de camp, ajustati inaltimea condensorului, deschideti diafragma de camp). Pentru camp intunecat deschideti diafragma condensatorului complet. Acest fapt permite condensorului sa opereze la maximul aperturii numerice.
Inserati stopul central pe traseul optic al microscopului. In functie de modelul microscopului, conectati atasamentul de camp intunecat, apasati slider-ul si rotiti discul condensorului la pozitia respectiva. Scoateti un ocular si introduceti telescopul de centrare. Slabiti suruburile de fixare si focusati planul focal din spate al obiectivului tragand in afara partea interioara a telescopului de centrare. Un disc stralucitor de lumina care este obturat partial de stopul central va fi vizibil in planul focal al obiectivului. Daca nu, folositi suruburile de centrare si miscati stopul central astfel incat discul luminos sa fie complet acoperit.
Acum priviti imaginea specimenului. In caz ca fundalul nu este perfect intunecat. ridicati/coborati cu grija condensorul pana cand fundalul devine intunecat. Concentrati-va pe o singura particula din specimen. Toate particulele ar trebui sa aiba o iluminare simetrica de jur imprejurul marginilor. Daca nu, centrati stopul de camp intunecat mai precis. Marginea fiecarei particule ar trebui sa afiseze o luminozitate uniforma.
Daca nu exista un telescop de centrare la indemana, folositi o coala de hartie ca specimen. In timp ce ridicati si coborati condensorul, un punct luminos va aparea pe hartie (a). Dedesubt sau deasupra va aparea un punct intunecat. Acest punct trebuie sa fie un pozitie centrala (b).
Daca nu (c, d), stopul de camp intunecat trebui centrat. Microscopul e acum gata pentru observatii Aveti grija ca lamela sa fie curata pe ambele parti. Fiecare amprenta, particula de praf va cauza lumina parazita si va distruge estetica imaginii. De aceea, aceasta metoda mai este numita si metoda de detectie a prafului.
© Toate drepturile asupra continutului acestui site apartin STARMAX S.R.L. Orice reproducere partiala sau totala fara acordul STARMAX S.R.L. reprezinta un furt si va fi pedepsita conform legii.